■ 產(chǎn)品介紹
AH109菌株來源于PJ69-2A 酵母菌株，將lacZ報告基因引入PJ69-2A誕生了AH109，此菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為：trp1，leu2，報告基因為：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。質(zhì)粒pGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒pGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系統(tǒng)原理：一個完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個結(jié)構(gòu)域：位于N端1~174位氨基酸區(qū)段的DNA結(jié)合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結(jié)合。而AD可以啟動UAS下游的基因進行轉(zhuǎn)錄。BD和AD單獨存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時，則呈現(xiàn)完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下，BD不與AD結(jié)合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait–BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD)，如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。AH109有四個報告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分別由三種不同的啟動子(GAL1，GAL2，MEL1)啟動，這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區(qū)相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。 |
基因型： | MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS- GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ |
■ 基本信息
培養(yǎng)基: | YPDA |
菌株類別: | 酵母菌 |
培養(yǎng)條件: | 28℃，有氧，YPDA |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化: | 化轉(zhuǎn)、電轉(zhuǎn) |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應(yīng)用: | 酵母雙雜交 |
■ 使用方法
建議超凈臺內(nèi)劃線涂板，得到單克隆后再進行其他實驗操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 本產(chǎn)品僅可用于實驗室研究，不能用于動物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，菌株的活力會逐漸下降。
